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            非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒

            更新時(shí)間:2021-01-28 點(diǎn)擊次數(shù):1191

            非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒【JD-ZWSJ1

            非洲豬瘟試劑盒

            非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒使用說明書

              (快提核酸擴(kuò)增試劑盒)

              【產(chǎn)品名稱】

              通用名稱:非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒(PCR熒光探針法)

              英文名稱:Diagnostic Kit for African Swine Fever Virus (PCR Fluorescence Probing)

              [預(yù)期用途]

              本試劑盒主要用于檢測(cè)疑似感染豬抗凝血及臨床病料中的非洲豬瘟病毒(ASFV, African Swine Fever

              Virus)核酸,適用于非洲豬瘟病毒的檢測(cè)、輔助診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

              【試劑盒組分】

              1、試劑盒組成及貯藏條件

              名稱50 T貯藏條件

              1、反應(yīng)液AImL-20°C

              2、反應(yīng)液BImL

              3、陽性對(duì)照250μL

              4、陰性對(duì)照250μL

              5、PCR反應(yīng)液850μL

              6、酶混合液150μL

              2、需自備材料:生理鹽水、無菌槍頭、熒光PCR反應(yīng)管、記號(hào)筆等。

              【操作步驟】

              一、樣品制備

              1、 血液樣品:采集抗凝血(抗凝劑為EDTA)或血清樣品,編號(hào)備用。

              2、 組織樣品:采集脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、扁桃體等病變組織樣品或軟蜱0.1g(黃豆粒大小),眼科剪剪碎于組織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨,再加1mL生理鹽水混勻,4°C條件下8000 rpm/分鐘離心2分鐘,取上清液于滅菌離心管中,編號(hào)備用。

              二、DNA提取

              取反應(yīng)液A 20μL分別加入到新的1.5mL離心管,加入抗凝而或血清或組織上清液2μL混勻,室溫(20°C左右)靜置3分鐘,加入反應(yīng)液B 20μL,吹打混勻即可,若為抗凝全血,則需8000rpm/分鐘再離心2分鐘后做為待檢DNA溶液。

              二、PCR擴(kuò)增

              1、配液:取出PCR反應(yīng)液、酶混合液,在室溫*融化后,充分混勻,瞬離,可將酶混合液全部取岀直接加入到PCR反應(yīng)液中,充分混勻,瞬離后按每份20μL分裝使用;或按照每份PCR反應(yīng)液17μL, 酶混合液3μL的比例取一定的試驗(yàn)用量,混合兩種反應(yīng)液,瞬離后按照每份20μL分裝到熒光PCR 反應(yīng)管中,剩余試劑立即凍存;(操作過程要注意避光)

              2、加樣擴(kuò)增:分別向上述PCR反應(yīng)管中加入5μL樣本 DNA或陰性對(duì)照或陽性對(duì)照,混勻并瞬離, 放入熒光PCR儀上運(yùn)行以下程序:

              步驟條件循環(huán)數(shù)

              UNG處理50°C: 2分鐘1

              預(yù)變性95°C: 3分鐘1

              預(yù)擴(kuò)増95°C: 8 秒 55C: 8 秒5

              PCR擴(kuò)增95°C: 8 秒 55°C: 8 秒40

              熒光通道選擇FAM,在40循環(huán)階段每個(gè)循壞的55°C時(shí)收集熒光信號(hào)。設(shè)置擴(kuò)增體系為25μL,同時(shí)要選擇 passive reference 和 quencher 為 none 的模式。

              (注:若熒光PCR儀(如ABI7500)按說明書中的反應(yīng)程序設(shè)置后因持溫時(shí)間短無法運(yùn)行,可將預(yù)擴(kuò)增和PCR擴(kuò)增條件變更為95°C: 5秒 55°C:30秒。)

              【結(jié)果判定】

              1、 基線和閾值設(shè)定;基線調(diào)整取6-15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào),閾值設(shè)定以閾值線剛好超過陰性對(duì)照檢測(cè) 熒光曲線的高點(diǎn)為原則。

              2、 質(zhì)量控制:反應(yīng)結(jié)束后,陰性對(duì)照的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)無特定的擴(kuò)增曲線,Ct值為>38或無;陽性對(duì)照 的Ct值應(yīng)≤30.0,且明顯的擴(kuò)增曲線;否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

              3、 樣品判定:待檢樣品熒光信號(hào)有指數(shù)型增加,且結(jié)果顯示Ct值<35.0,報(bào)告為陽性;未檢測(cè)到Ct 值或Ct值>38或無明顯擴(kuò)增曲線,則樣品判定為陰性。35≤Ct值≤8時(shí),復(fù)檢一次,重復(fù)結(jié)果為陽性者判定為陽性,否則判定為陰性。

              【注意事項(xiàng)】

              1、實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本試劑盒說明書,嚴(yán)格按照操作步驟執(zhí)行,在操作過程中對(duì)時(shí)間、試劑體積等精 確控制可以獲得好的結(jié)果。

              2、 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照有關(guān)規(guī)定分區(qū)管理。各區(qū)間人員、器材、試劑及空氣流向應(yīng)有產(chǎn)格要求。

              3、 有關(guān)耗材確保潔凈、無菌,核酸提取完成后盡快進(jìn)入下一步試驗(yàn)或冷凍保存。

              4、預(yù)混后的試劑應(yīng)盡量在短期內(nèi)使用完畢,戶外使用應(yīng)在加冰袋的泡沫盒保存,每日試驗(yàn)完畢應(yīng)及時(shí) 冷凍保存。

              5、 對(duì)于熒光PCR管要避免徒手或使用過的手套接觸,檢測(cè)過程中使用不帶熒光物質(zhì)一次性乳膠手套。

              6、 凍存試劑使用前應(yīng)于室溫下*融化,充分混勻,瞬時(shí)離心使液體*沉于管底。

              7、 樣品、陰性對(duì)照封蓋后,在通風(fēng)環(huán)境添加陽性對(duì)照并及時(shí)封蓋,避免組分間及氣溶膠等假陽性污染。

              8、 擴(kuò)增反應(yīng)完畢后的PCR管嚴(yán)禁開蓋,應(yīng)和試驗(yàn)產(chǎn)生的其它廢棄物一起及時(shí)收集,遠(yuǎn)離PCR實(shí)驗(yàn)室 進(jìn)行無害化處理。

              【規(guī)格】50頭份/盒。

              【貯藏與有效期】-20°C以下避光保存,有效期12個(gè)月。

              僅供獸醫(yī)診斷使用

             

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            山東競(jìng)道光電科技有限公司主要經(jīng)營水文監(jiān)測(cè)站,氣象站,氣象儀,超聲波氣象站,農(nóng)業(yè)氣象站,土壤墑情監(jiān)測(cè)站,負(fù)氧離子監(jiān)測(cè)站,非洲豬瘟檢測(cè)儀等產(chǎn)品。

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